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液相色谱法的应用范围十分广泛,对样品的适用性广,不受分析对象挥发性和热稳定性的-,几乎所有的化合物包括高沸点、极性、离子型化合物和大分子物质均可用液相色谱法分析测定,因而弥补了气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中,可用气相色谱分析的约占20% ,而80% 则需用液相色谱来分析。hplc因其具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、及-分析,己将该法收载于药典。
液相色谱基本原理是分离度(也叫分辨率)正比于
四分之理论塔板数n的平方根乘以
选择因子a比上a-1再乘以
分离因子k+1比上k
我认为分离度和这些变量是正比关系而不是准确的等于,如果非要说是等于的关系,再加上一个常数可能会更合理。
n和柱长(正比)、粒径(反比)、固定项填料(全多孔硅胶型,表面多孔/核壳型)有关
a和流动相种类(反向色谱:和)、ph(2到9)、柱温有关
分离因子/保留因子(平衡状态下,固定相中含量与流动相中的比值)和流动相种类、流动相比例、柱温、固定相填料有关
液相色谱的部件按流动相流路的顺序:
流动相***真空脱气机(在线脱气装置)***泵(二元泵和四元泵:区分,有几种流动相按一定比例混合)***进样器(手动和自动)***柱温箱***检测器(紫外:朗伯-比尔定律,质谱:荷质比,荧光:跃迁,e-:蒸发光)
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